1. 從平板上挑取單菌落細菌，接種入15ml培養基中。50ml離心管，250轉，37oc過夜培養。
2. 將培養好的小管菌液，倒入裝有100ml培養基的250ml錐形瓶中，250轉，37oc培養1小時。
3. 當菌液od600達到0.5時，開始製作感受態細胞。
4. 將菌液搖勻，倒入離心管中，至於冰上，預冷10min。
5. 4oc，3500rpm/s，離心10min。
6. 棄去培養液（盡量棄乾淨），用2-3ml 0.1m 預冷的cacl2輕輕重懸細胞。加至終體積為15ml cacl2。
7. 4oc，3500rpm/s，離心10min。
8. 棄去cacl2溶液（盡量棄乾淨），按照 15% 甘油，85% cacl2加入4ml混合溶液，重懸細胞，並分裝，100ul-200ul/ep管。
注意事項:
由於加入cacl2後，細胞脆弱，整個過程盡量在冰上完成。
cacl2和甘油要提前預冷。
轉化：1. 在50ul 感受態細胞中，加入1-2ul提取的質粒。
如質粒濃度較高，則加入1ul；如質粒濃度較低，則加入2ul。
質粒濃度可通過跑膠估算或是dna濃度計測得。
2. 置於冰上，冷卻10-20min。
3. 置於42oc水浴鍋，熱激45s。
4. 加入300ul培養基，200轉，37oc培養45min。
5. 用滾珠法將200ul菌液塗平板。
6. 將塗過平板的滾珠再在另一新平板上鋪平板，以挑取單轉殖。