植物草酸氧化酶 OxO 中文說明書400pg

2022-06-01 09:21:03 字數 1994 閱讀 7829

中文說明書

植物草酸氧化酶(oxo)elisa檢測試劑盒

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(elisa)。往預先包被植物草酸氧化酶(oxo)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、hrp標記的檢測抗體,經過溫育並徹底洗滌。用底物tmb顯色,tmb在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的植物草酸氧化酶(oxo)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(od 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及儲存方法

1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液後,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿:edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5. 儲存:如果樣本收集後不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存於-20℃,避免反覆凍融,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1. 試劑盒儲存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬於正常現象,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫乾燥)儲存。

3. 預處理後的樣本無需稀釋,直接取10μl加樣即可。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:400、200、100、50、25、0u/ml.

試劑的準備

20×洗滌緩衝液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min後甩盡孔內液體,在吸水紙上拍幹,如此洗板5次。

2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μl,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條,剩餘板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設定標準品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什麼都不加;標準品孔各加不同濃度的標準品50μl;

3. 待測樣本孔先加待測樣本10μl,再加樣本稀釋液40μl;

4. 隨後標準品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(hrp)標記的檢測抗體50μl,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 所有孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。

7. 所有孔加入終止液50μl,15min內,在450nm波長處測定各孔的od值。

結果判斷

繪製標準曲線:在excel工作表中,以標準品濃度作橫座標,對應od值作縱座標,繪製出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒效能

1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關係數r值,大於等於0.9200。

2. 靈敏度:最低檢測濃度小於1.0 u/ml。

3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重複性:板內、板間變異係數均小於15%。

5. 貯藏:2-8℃,避光防潮儲存。

6. 有效期:6個月

7. 檢測範圍:6.25u/ml-400u/ml

免責宣告

1. 試劑盒僅供研究使用,不得用於臨床實驗或植物體實驗,否則所產生的一切後果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,後果由實驗者承擔。

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