該試驗以蝴蝶蘭原優良品種滿天紅花梗為外植體,對休眠芽萌發誘導、葉片原球莖誘導、原球莖增殖、根誘導和組培苗的移栽等方面進行初步研究,得出以下結果:1、花梗休眠芽的誘導在夏季、秋季、春季三個季節選取含休眠芽的花梗節段進行培養,對汙染率、休眠芽萌發誘導率和芽生長狀況進行了比較.試驗表明秋季選取的花梗外植體滅菌效果最好,休眠芽萌發誘導率最高.
ms+ba 5.0培養基較適合休眠芽的誘導.2、無菌苗葉片的原球莖誘導該試驗以無菌苗葉片為外植體誘導原球莖產生,結果表明,ba濃度5.
0mg·l-1最適合葉片原球莖誘導,新增15％(v/v)椰乳(cw)能提高原球莖的誘導率,並有利於原球莖的生長.ms+ba5.0+cw15%培養基較適合誘導葉片產生原球莖,誘導率最高達到38%.
3、原球莖的增殖在ms培養基中新增一定濃度的ba和果汁能提高原球莖的增殖率.另外,新增聚乙烯吡咯烷酮(pvp)100~200mg·l<'-1>能有效控制培養基的酚汙染、提高原球莖的增殖率.ms+ba5.
0+cw15%培養基較適合原球莖的增殖.4、根的誘導在1/2ms培養基中附加一定濃度naa(0.1~0.
5mg·l<'-1>)和多效唑met(0.1~0.5mg·l<'-1>)與ba配合,能誘導小苗生根.
用多效唑誘導生根,幼苗矮壯,葉片較綠,有利提高幼苗的移栽成活率.新增0.3g·l<'-1>活性炭(ac)能大大提高生根苗的平均根數和平均根長.
對根誘導較適合的培養基是:1/2ms+ba2.0+naa0.
1+ac或1/2ms+ba 2.0+met 0.3.
5、組培苗移栽基質透氣性及水分對組培苗成活率影響較大.基質水分多,基質透氣性不好,易造成組培苗死亡蝴蝶蘭原優良品種滿天紅花
梗為外植體,對休眠芽萌發誘導、葉片原球莖誘導、原球莖增殖、根誘導和組培苗的移栽等方面進行初步研究,得出以下結果:1、花梗休眠芽的誘導在夏季、秋季、春季三個季節選取含休眠芽的花梗節段進行培養,對汙染率、休眠芽萌發誘導率和芽生長狀況進行了比較.試驗表明秋季選取的花梗外植體滅菌效果最好,休眠芽萌發誘導率最高.
ms+ba5.0培養基較適合休眠芽的誘導.2、無菌苗葉片的原球莖誘導該試驗以無菌苗葉片為外植體誘導原球莖產生,結果表明,ba濃度5.
0mg·l-1最適合葉片原球莖誘導,新增15％(v/v)椰乳(cw)能提高原球莖的誘導率,並有利於原球莖的生長.ms+ba5.0+cw15%培養基較適合誘導葉片產生原球莖,誘導率最高達到38%.
3、原球莖的增殖在ms培養基中新增一定濃度的ba和果汁能提高原球莖的增殖率.另外,新增聚乙烯吡咯烷酮(pvp)100~200mg·l<'-1>能有效控制培養基的酚汙染、提高原球莖的增殖率.ms+ba 5.
0+cw 15%培養基較適合原球莖的增殖.4、根的誘導在1/2ms培養基中附加一定濃度naa(0.1~0.
5mg·l<'-1>)和多效唑met(0.1~0.5mg·l<'-1>)與ba配合,能誘導小苗生根.
用多效唑誘導生根,幼苗矮壯,葉片較綠,有利提高幼苗的移栽成活率.新增0.3g·l<'-1>活性炭(ac)能大大提高生根苗的平均根數和平均根長.
對根誘導較適合的培養基是:1/2ms+ba2.0+naa0.
1+ac或1/2ms+ba2.0+met0.3.
5、組培苗移栽基質透氣性及水分對組培苗成活率影響較大.基質水分多,基質透氣性不好,易造成組培苗死亡蝴蝶蘭原優良品種滿天紅花梗為外植體,
對休眠芽萌發誘導、葉片原球莖誘導、原球莖增殖、根誘導和組培苗的移栽等方面進行初步研究,得出以下結果:1、花梗休眠芽的誘導在夏季、秋季、春季三個季節選取含休眠芽的花梗節段進行培養,對汙染率、休眠芽萌發誘導率和芽生長狀況進行了比較.試驗表明秋季選取的花梗外植體滅菌效果最好,休眠芽萌發誘導率最高.
ms+ba5.0培養基較適合休眠芽的誘導.2、無菌苗葉片的原球莖誘導該試驗以無菌苗葉片為外植體誘導原球莖產生,結果表明,ba濃度5.
0mg·l-1最適合葉片原球莖誘導,新增15％(v/v)椰乳(cw)能提高原球莖的誘導率,並有利於原球莖的生長.ms+ba5.0+cw15%培養基較適合誘導葉片產生原球莖,誘導率最高達到38%.
3、原球莖的增殖在ms培養基中新增一定濃度的ba和果汁能提高原球莖的增殖率.另外,新增聚乙烯吡咯烷酮(pvp)100~200mg·l<'-1>能有效控制培養基的酚汙染、提高原球莖的增殖率.ms+ba 5.
0+cw 15%培養基較適合原球莖的增殖.4、根的誘導在1/2ms培養基中附加一定濃度naa(0.1~0.
5 mg·l<'-1>)和多效唑met(0.1~0.5mg·l<'-1>)與ba配合,能誘導小苗生根.
用多效唑誘導生根,幼苗矮壯,葉片較綠,有利提高幼苗的移栽成活率.新增0.3g·l<'-1>活性炭(ac)能大大提高生根苗的平均根數和平均根長.
對根誘導較適合的培養基是:1/2ms+ba2.0+naa 0.
1+ac或1/2ms+ba 2.0+met 0.3.
5、組培苗移栽基質透氣性及水分對組培苗成活率影響較大.基質水分多,基質透氣性不好,易造成組培苗死亡
pvp粉末與水溶液均較穩定，可長期儲存。水溶液為膠體溶液完全經得起115度30分滅菌，滅菌前後其性質無根本性的變化。只是滅菌後溶液略顯黃色。
2.比較老的藥劑學課本中有關於pvp的滅菌水溶液作為血漿代用品的介紹。處方工藝都有詳細的說明。
(pvp的滅菌水溶液在二戰時期間即已作為血漿代用）。3.我以前做的幾個靜脈注射劑中加入pvp，其在增溶、穩定，防止藥物結晶析出方面能起到很好的效果。
可惜現在不能用了。藥審中心有說明：在注射劑中禁用pvp
4防止外植體產生褐變的對策
從理論上講,酶促褐變可以通過以下三種方法加以抑制:一是除去引起氧化的物質——氧；二是捕捉或減少聚合反應的中間產物；三是抑制有關的酶。實際操作上，下列措施是被認為行之有效的。
4.1適當外植體的選擇
取材時應注意選擇褐變程度較小的品種和部位作外植體。成年植株比幼苗褐變程度厲害，夏季材料比冬季及早春和秋季材料的褐變要嚴重。冬季的芽不易生長，宜選用早春和秋季的材料作為外植體。
王異星[5]用荔枝無菌苗不同組織的誘導試驗表明，莖最容易誘導出愈傷組織，培養2週後長出淺黃色的愈傷組織；葉大部分不能產生愈傷組織或誘導出的愈傷組織中度褐變；而根極大部分不產生愈傷組織，誘導出的愈傷組織全部褐變。
4.2對外植體的處理
通過對較易褐變的外植體材料的預處理能減輕醌類物質的毒害作用。處理方法如下：外植體經流水沖洗後，在2-5℃的低溫下處理12-24小時，再用公升汞或70%酒精消毒，然後接種於只含有蔗糖的瓊脂培養基中培養5-7天，使組織中的酚類物質部分滲入培養基中。
取出外植體用0.1%漂白粉溶液浸泡10分鐘，再接種到合適的培養基中。若仍有酚類物質滲出，3-5天後再轉移培養基2-3次，當外植體的切口癒合後，酚類物質減少，這樣可使外植體褐變減輕或完全被抑制。
何瓊英等[6]用抗壞血酸預處理香蕉吸芽外植體，能減輕外植體褐變，從而提高芽叢誘導率。
4.3適宜的培養基
培養基的成分與褐變程度有關，要考慮所選培養基的狀態和型別。
4.3.1適當的無機鹽濃度張妙霞等[7]在柿樹組織培養防止褐變所進行的試驗中，4種培養基的無機鹽以改良ms(大量元素減半)和1/2ms的效果最好，ms的效果較差，結果證明低濃度的無機鹽可促進外植體的生長與分化，減輕外植體褐變的程度。
徐振彪[1]在對玉公尺幼胚耐nacl愈傷組織的篩選表明，隨nacl濃度公升高，褐變現象加重。
4.3.2適當和適量的激素王異星[5]在荔枝的組織培養過程中，培養基中新增1 mg/l ba + 0.
5mg/l 2,4-d時，愈傷組織較堅硬，增殖緩慢，易產生褐變。培養基中新增1mg/l ba+1mg/l 2,4-d時，愈傷組織淺黃疏鬆，增殖也快。
4.3.3培養基的硬度在一定範圍內，瓊脂用量大，培養基硬度大，褐變率低[8]，這可能是培養基的硬度影響了酚類物質的擴散速度的緣故。
4.3.4培養基中水的硬度的影響硬度低的蒸餾水褐變率低,而使用硬度較高的自來水,褐變嚴重,甚至會出現褐變死亡[8]。
這可能是配製培養基的水改變了培養基中無機鹽的濃度,間接地影響了植物外植體的褐變。
4.3.5培養基的ph值在水稻體細胞培養中，ph值為4.
5-5.0時ms液體培養基可保持愈傷組織處於良好的生長狀態，其表面呈黃白色，而ph值為5.5-6.
0時，愈傷組織嚴重褐變[9]。一般來說，酸性環境(ph值為4.5-5.
0)不利於褐變過程的發生[10]。
4.3.6培養條件如溫度過高或光照過強，光照會提高ppo的活性，促進多酚類物質的氧化，從而加速被培養的組織褐變。
高濃度co2也會促進褐變，其原因是環境中的co2向細胞內擴散，細胞內co32-增多，co32-與細胞膜上的co32-結合，使有效co32-減少，導致內膜系統瓦解，酚類物質與ppo相互接觸，產生褐變[11]。因此，初期培養要在黑暗或弱光下進行。4.
4新增褐變抑制劑和吸附劑
褐變抑制劑主要包括抗氧化劑和ppo抑制劑。在培養基中加入偏二亞硫酸鈉、l-半胱氨酸、抗壞血酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇等抗氧化劑都可以與氧化產物醌發生作用，使其重新還原為酚[12]。由於其作用過程均為消耗性的，在實際應用中應注意新增量，其中l-半胱氨酸和抗壞血酸均對外植體無毒***，在生產應用中可不受限制。
在水稻細胞的培養基中，新增植酸(pa)，可防止褐變，pa分子中眾多的羥基產生抗氧化作用，使生色物質的含量下降或pa與ppo分子中的cu2+結合，從而降低了其活力。陳學森等[13]在對植酸在銀杏組織培養中應用的研究中也證實了植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用。
常用的吸附劑有活性炭和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。活性炭是一種吸附性較強的無機吸附劑，能吸附培養基中的有害物質，包括瓊脂中的雜質、培養物在培養過程中分泌的酚、醌類物質以及蔗糖在高壓消毒時產生的5-羥甲基糠醛等,從而有利於培養物的生長。粉末狀的活性炭與顆粒狀的活性炭相比吸附性更強，一般在培養基中加入1-4g/l的活性炭。
在使用過程中應注意，盡量用最低濃度的活性炭來對抗褐變的產生，因為活性炭的吸附作用是沒有選擇性的，在吸附物質的同時，也會吸附培養基中的其他成分，對外植體的誘導分化會產生一定的負面影響[14]。而聚乙烯吡咯烷酮(pvp)是酚類物質的專一性吸附劑，在生化製備中常用作酚類物質和細胞器的保護劑，可用於防止褐變[15]。
4.5進行細胞篩選和多次轉移
在組織培養過程中，經常進行細胞篩選，可以剔除易褐變的細胞。在外植體接種1-2天後應立即轉移到新鮮培養基中，能減輕酚類物質對培養物的毒害作用，降低抑制作用，使外植體盡快分生，連續轉移5-6次，可基本解決外植體的褐變問題。
香水白掌離體培養實驗結果表明,葉片在1 /2ms培養基中新增pvp 1 000 mg /l,5天繼代轉接1次,抗褐變效果較好;葉柄在pvp為1 000mg /l,瓊脂濃度為7 g/l的培養基中, 5天繼代轉接1次,可減少褐變的發生
適當降低培養基的無機鹽濃度,酸性環境( ph值4. 5~ 5. 0)不利於褐變的發生。
加入賴氨酸、活性炭、抗壞血酸的培養基, 25天時有80%出現褐變並伴有死亡現象,而加入0. 7g / l聚乙烯吡咯烷酮( pvp k - 90)的培養基褐變率為16% ,對抑制桑樹組培苗的褐變有良好效果。
pvp濃度為1%，褐變率為41.67%，褐變等級為2，生長率為100%，除褐變外，愈傷組織長勢很好；2）pvp濃度為2%，褐變率為33.33%，褐變等級為1，生長率為100%，除褐變外，愈傷組織長勢最好，且無褐變的試管均為綠色，即使褐變試管也只是零星表現；3）pvp濃度為3%，褐變率為40%，褐變等級為2，生長率為100%，只有少量初始接種部分褐變，其餘部分愈傷組織長大，呈淡墨色；4）pvp濃度為4%，褐變率為58.
33%，褐變等級為3，生長率為100%，除褐變外，愈傷組織長勢較好；5）pvp濃度為ck，褐變率為50%，褐變等級為2，生長率為100%，愈傷組織生長明顯。
在培養基中加入聚乙烯吡咯烷酮可以減輕愈傷組織的褐變情況，而且愈傷組織的長勢良好。特別是加入濃度2%的和其他濃度的比較結果，褐變率更低，防褐變效果更好。但加入濃度4%時褐變率並沒有降低。
可以推測並不是濃度越高越好，相反，濃度增高會使褐變率公升高，防褐變效果降低。
褐變問題
①初代培養時，剝取組織塊最好能夠在無菌水中進行；
②初代培養採用液體培養比用固體培養效果好；
③在培養基中單獨或復合使用防褐變物質：芸香苷50-100毫克/公升、20%硫代硫酸鈉溶液5毫公升/公升、檸檬酸0.05-0.
5%、活性炭1-4克/公升、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）5-10克/公升；
④從開始培養到成活的一段時間內保持攝氏溫度17-20度；
⑤調整好培養基的酸鹼度，以酸鹼度為5.5時成活率高；
⑥6-8月份高溫季節，外植體易褐變，成活率低；
⑦從新生的假球莖上取芽，不僅能夠減少汙染，而且成活率高。
硬度為5g/l瓊脂的ms培養基,並新增0.1mg/lnaa＋0.1mg/liba＋1.
0mg/l6-ba＋30g/l蔗糖＋聚乙烯吡咯烷酮（pvp）2g/l可有效控制褐變並獲得較高的愈傷誘導率。
聚乙烯吡咯烷酮PVP的性質和用途
應用領域 化妝品pvp優異的表面活性 成膜性 對 無刺激 無過敏反應等特點，在日用化工尤其是在化妝品 護膚品 護髮品及洗滌用品等方面的應用具有廣闊的前景。如加有pvp的噴發膠和摩絲定型持久，具有良好的光澤，而且由於pvp具有一定的吸水性，使頭髮潤澤光滑而不會顯得枯燥。加有pvp的護膚品，不僅保濕效果...
聚乙烯材料特性
原材料各種效能 聚乙烯 pe 原料及相關特性 聚乙烯由乙烯進行加聚而成的高分子化合物，根據聚合條件的不同實際分子量從一萬至幾百萬不等，聚乙烯為白色蠟狀半透明材料，柔而韌，稍能伸長，無毒，易燃，燃燒時熔融滴落，發出石蠟燃燒時的味道，聚乙烯的效能與其分子量有關，也與其結晶度有關。一 聚乙烯的物理效能 聚...
氯化聚乙烯介紹
1萬噸 年氯化聚乙烯專案分析 僅供參考 前言氯化聚乙烯 cpe 是一種新型的高分子材料,它由高密度聚乙烯在加壓條件下經氯氣氯化而得。其分子結構中具有 ch2 ch2 ch2 chcl chcl chcl 的鏈段,因此亦可視為乙烯 氯乙烯 1,2 二氯乙烯的三元共聚物。由於3組分的含量 排列次序以及聚...