白細胞分類計數標準操作程式

2023-01-11 00:42:04 字數 1456 閱讀 5477

富順縣人民醫院白細胞分類計數標準操作程式

一.目的:規範白細胞手工分類標準操作

二.適用範圍:適用於鏡下白細胞分類

三.支援檔案:全國臨床檢驗操作規程第三版

四.原理:血塗片瑞氏染色分類法

五.儀器:olympus顯微鏡

六.試劑:瑞氏—姬姆薩復合染色液

i液:取瑞氏染粉1g、姬姆薩染粉0.3g,置潔淨研缽中,加少量甲醇(分析純),研磨片刻,吸出上層染液。

再加少量甲醇,繼續研磨,再吸出上液。如此連續幾次,共用甲醇500ml。收集於棕色玻璃瓶中,每天早、晚各振搖3min,共5天,以後存放一周即能使用。

ⅱ液:ph6.4—6.8磷酸鹽緩衝液,磷酸二氫鉀(無水) 6.64g,磷酸氫二鈉(無水) 2.56g, 加少量蒸餾水溶解,用磷酸鹽調整ph,加水至1000ml。

七.樣本要求:靜脈採血使用edta-k2抗凝。毛細血管採血應擦去第一滴血,以免混入組織液影響結果。

八.操作步驟:

1.採血後取混勻後血液約10ul置於潔淨玻片一端,選取邊緣光滑平整的推片,角度適宜速度適中均速推制厚薄適宜的血膜片,血膜應呈舌狀,頭、體、尾清晰可分。

2.推好的血膜在空氣中晃動,以促使快乾。天氣寒冷或潮濕時,應於37c溫箱中保溫促幹,以免細胞變形縮小。

3.染色

(1)瑞氏—姬姆薩染色法:平置玻片於染色架上,滴加染液3~5滴,使其迅速蓋滿血膜,約lmin後,滴加緩衝液3~5滴,輕輕搖動玻片或對準血片吹氣,與染液充分混和,5~lomin後用水衝去染液,待幹。

4、先在低倍鏡下瀏覽全片,了解染色的好壞和細胞分布情況,觀測有無異常細胞。

5.選擇塗片的體尾交界處染色良好的區域,在油鏡下計數100個白細胞,按其形態特徵進行分類計數,求出各類細胞所佔比值 (百分率)。

6.結果輸入上海新和中文作業系統列印報告。

九.參考範圍: 見表l—l—1。

表1—1—1 白細胞分類計數參考值

細胞類別**

中性粒細胞

桿狀核0.01-0.05(1%-5%)

分葉核0.50-0.70(50%~70%)

嗜酸性粒細胞0.005-0.05(0.5%~5%)

嗜鹼性粒細胞0-0.01 (0%~1%)

淋巴細胞0.20-0.40(20%~40%)

單核細胞0.03-0.10 (3%~10%)

十.注意事項:

1.要避免重複計數,分類時應由血膜邊緣向**依次上下呈曲線移動觀察,避免主觀視野。

2. 白細胞總數超過20x109/l,應分類計數200個細胞。白細胞數明顯減少的血片,可檢查多張血片。

3.白細胞形態變化較大,應經常由高年資檢驗人員進行核實,以減少誤差。

4.若看見有核紅細胞,不計入白細胞總數,應以分類100個白細胞看到的有核紅細胞總數來報告,並註明有核紅細胞所屬階段。

5.ph對細胞染色的影響:ph過低

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