細胞**實驗室工藝流程按種類分為：
一、試劑耗材入庫記錄，試劑耗材使用記錄，試劑配製記錄，配製的試劑使用記錄。
入庫需要記錄產品的名稱、批號、有效期、數量、存放位置、入庫時間。
試劑耗材使用記錄包括名稱、批號、用途，時間。
試劑配製記錄包括原料的名稱、批號，配製試劑的時間、有效期、批號。
配製的試劑使用記錄包括使用的時間、批號、用途。
二、實驗記錄，包括採血、分血、細胞接種、補液、質檢、回輸。
採血有2個資訊實驗室需要記錄，包括濃縮白細胞體積和血漿體積。
分血有需要記錄使用的分離液的量和單個核細胞數量。
細胞接種需要記錄dc、cik、cd3ak、γδt、nk等細胞接種數量、培養基體積、細胞因子新增的量。
補液需要記錄補液的時間和體積。
質檢需要做細菌真菌培養、內毒素檢測、革蘭氏檢測，記錄做這些質檢的時間。
回輸需要記錄回輸的細胞種類、時間、細胞體積、細胞數量。
三、細胞檢測記錄，包括細菌真菌培養，內毒素檢測，革蘭氏檢測，流式檢測。
記錄內容包括樣品的**、檢測時間、結果、檢測人。
四、清洗消毒記錄。
包括清洗消毒的時間、方式、消毒有效期。
細胞培養流程圖
no：_
自體細胞製劑製備記錄
患者基本情況
採血日期：
細胞製備標準操作記錄
細胞凍存及復甦標準操作記錄
自體細胞製劑回輸記錄
自體細胞製劑檢控記錄
cik細胞培養標準操作流程
一、 溶液的配置
1、 熱滅活自體血漿的製備：將自體血漿裝在無菌的離心管內，放入56攝氏度水浴鍋內熱滅活40分鐘，取出用2500轉離心10分鐘，取出上清備用。
2、 ifn-r母液（1000x）：用無血清培養基配成100萬iu/ml。
3、 cik混合因子(100x)：冰箱4度儲存。
4、 cik完全培養基：無血清培養基加1%-2%熱滅活自體血漿。
二、 cik細胞製備：
1、 血細胞單採機採集病人濃縮白細胞和血漿（80-100ml）。
2、 準備2支50ml離心管，每管加入淋巴細胞分離液20ml。
3、 將濃縮白細胞從血袋中取出，直接等量加到上述2支50ml離心管淋巴細胞分離液上面，2000轉離心25分鐘，公升降速調到最低值。
4、 取出上層的血漿收集到一支50ml離心管中，餘下的部分除紅細胞外全部收集到2支50ml離心管中，加生理鹽水到50ml，1500轉離心10分鐘，去除上清，合併2支管內的細胞到一支50ml離心管中，加50ml生理鹽水，取20ul樣品用於計數，1200轉離心7分鐘，去除上清。
5、 所有的血漿留出12支5ml用於回輸，其餘全部56攝氏度滅活40分鐘，滅活完成後2500轉離心10分鐘，收集上清備用。
6、 將細胞用cik完全培養基配成1x106/ml，加入ifn-r母液至1000iu/ml，接種1個細胞培養袋，袋內加200ml cik完全培養基。
7、 24小時後，按1:100加入cik混合因子。
8、 第5天，按4倍稀釋新增含300iu/ml il-2的cik完全培養基。
9、 第8天到第9天，按2倍稀釋新增含300iu/ml il-2的cik完全培養基。同時取樣做細菌真菌培養。
10、 以後每隔一天按2倍稀釋補一次液，第一次回輸前1天取樣送檢做革蘭氏染色檢查。
11、 等拿到細菌真菌培養結果後，檢查所有結果是否為陰性。cik培養到第10天-15天內回輸。
12、 回輸時收集細胞於離心管內，1200轉離心7分鐘，去除上清，收集細胞後加生理鹽水再離心2次，1200轉離心7分鐘。
13、 將收集到的細胞加入到150ml注射用生理鹽水中，加入5ml自體血漿，2萬iu il-2，留1ml細胞懸液到1.5ml 離心管中，4攝氏度存放3月備查。
14、 將完成的細胞懸液封好瓶口，核對病人姓名、性別、年齡、住院號、細胞數、無菌結果、病區及**專案，確認無誤後，貼上標籤，送病區進行回輸。
dc細胞培養標準操作流程
一、 溶液的配置
1、熱滅活自體血漿的製備：將自體血漿裝在無菌的離心管內，放入56攝氏度水浴鍋內熱滅活40分鐘，取出用2500轉離心10分鐘，取出上清備用。
2、dc基礎培養基：用無血清培養基+2%熱滅活自體血漿。
3、dc誘導劑(100x）：冰箱4度儲存。
4、dc培養基：dc基礎培養基加入dc誘導劑
4、dc成熟劑1(100x）：冰箱4度儲存。
5、dc成熟劑2（100x）：冰箱4度儲存。
二、 dc細胞製備：
1、 取pbmc，加入imdm培養基配成5x106/ml細胞懸液，按每孔3ml接種到6孔板內，放入培養箱。
2、 2小時後，取出，晃動去除上層雜細胞，留下貼壁的單核細胞（體積比其它細胞稍大），每孔加入3ml dc 培養基。
3、 第5天，按每孔30ul 加入dc成熟劑1，取樣做細菌、真菌培養。
4、 收集細胞前12小時每孔加入30ul dc成熟劑2，同時取樣送檢做革蘭氏染色檢查。
5、 dc培養到第7-8天，收集細胞，用生理鹽水洗3次，分成4份，其中乙份用於當天回輸，其餘凍存在-80度冰箱中。
6、 將生理鹽水清洗過的dc細胞加入到150ml注射用生理鹽水中，加入5ml自體血漿，留1ml細胞懸液到1.5ml 離心管中，4攝氏度存放3月備查。
7、 將完成的細胞懸液封好瓶口，核對病人姓名、性別、年齡、住院號、細胞數、無菌結果、病區及**專案，確認無誤後，貼上標籤，送病區進行回輸。
cd3ak細胞培養標準操作流程
一、 溶液的配置
1、 熱滅活自體血漿的製備：將自體血漿裝在無菌的離心管內，放入56攝氏度水浴鍋內熱滅活40分鐘，取出用2500轉離心10分鐘，取出上清備用。
2、 cd3ak混合因子(100x）：冰箱4度儲存。
3、 cd3ak完全培養基：無血清培養基+1%-2%熱滅活自體血漿+ cd3ak混合因子。
二、 cd3ak細胞製備：
1、 pbmc用cd3ak完全培養基配成1x106/ml，接種培養瓶或培養袋培養。
2、 第5天，按4倍稀釋新增cd3ak完全培養基。
3、 第8天到第9天，按2倍稀釋新增cd3ak完全培養基。同時取樣做細菌真菌培養。
4、 以後每隔一天按2倍稀釋補一次液，第一次回輸前1天取樣送檢做革蘭氏染色檢查。
5、 等拿到細菌真菌培養結果後，檢查所有結果是否為陰性。cd3ak培養到第10天-15天內回輸。
6、 回輸時收集細胞於離心管內，1200轉離心7分鐘，去除上清，收集細胞後加生理鹽水再離心2次，1200轉離心7分鐘。
7、 將收集到的細胞加入到150ml注射用生理鹽水中，加入5ml自體血漿，2萬iu il-2，留1ml細胞懸液到1.5ml 離心管中，4攝氏度存放3月備查。
8、 將完成的細胞懸液封好瓶口，核對病人姓名、性別、年齡、住院號、細胞數、無菌結果、病區及**專案，確認無誤後，貼上標籤，送病區進行回輸。
γδt細胞培養標準操作流程
一、 溶液的配置
1、 熱滅活自體血漿的製備：將自體血漿裝在無菌的離心管內，放入56攝氏度水浴鍋內熱滅活40分鐘，取出用2500轉離心10分鐘，取出上清備用。
2、 γδt混合因子(100x）：冰箱4度儲存。
3、 完全培養基：無血清培養基1%-2%熱滅活自體血漿。
二、γδt細胞製備：
1、 將pbmc用完全培養基配成2x106/ml，加入混合因子，接種培養瓶或培養袋培養。
2、 第5天，按2倍稀釋新增含400iu/ml il-2的完全培養基。
3、 第8天到第9天，按2倍稀釋新增含400iu/ml il-2的完全培養基。同時取樣做細菌真菌培養。
4、 以後每隔一天按2倍稀釋補一次液，第一次回輸前1天取樣送檢做革蘭氏染色檢查。
5、 等拿到細菌真菌培養結果後，檢查所有結果是否為陰性。γδt培養到第10天-15天內回輸。
6、 回輸時收集細胞於離心管內，1200轉離心7分鐘，去除上清，收集細胞後加生理鹽水再離心2次，1200轉離心7分鐘。
施工工藝流程 實驗制度
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