腺苷脫氨酶檢測方法研究進展

2022-04-10 20:21:29 字數 985 閱讀 4293

【摘要】 腺苷脫氨酶是嘌呤核苷代謝中重要的酶類,屬巰基酶,能催化腺嘌呤核苷轉變為次黃嘌呤核苷,再經核苷磷酸化酶作用生成次黃嘌呤,其代謝緩和終產物為尿酸。測定體液中ada活性對臨床某些疾病的鑑別、診斷、**以及免疫功能研究等具有重要意義。本文對各種檢測腺苷脫氨酶活性的方法學做了評述,並對檢測腺苷脫氨酶新技術進行了展望。

【關鍵詞】 腺苷脫氨酶;方法學;研究進展;綜述

1 ada的生物化學

腺苷脫氨酶(ada)廣泛分布於人體各組織中,以胸腺、脾和其他淋巴組織中含量最高,肝、肺、腎和骨胳肌等處含量較低。血液ada主要存在於紅、白細胞(淋巴細胞、粒細胞)中,其含量為血清中的40-70倍。ada 有兩種同工酶即ada1和ada2,其主要作用是催化腺苷, 2』-脫氧腺苷脫氨轉化為肌苷和2』-脫氧肌苷。

ada1普遍存在於人體內,保證了其作用底物腺苷和2』-脫氧腺苷含量的下調,因為乙個較低水平的腺苷、2』-脫氧腺苷對人體細胞發揮正常生理功能十分有益。它也存在於紅細胞內,紅細胞可通過某種有效的機制獲取2』-脫氧腺苷並使其內在化。因此,紅細胞對迴圈的2』-脫氧腺苷形成了乙個透析系統,以保護有核細胞不被過多的2』-脫氧腺苷損傷。

2 方法學發展趨勢

近十幾年來,隨著對ada的深入研究,檢測方法也不斷發展。現對檢測腺苷脫氨酶活性的方法主要特點進行簡述:

腺苷測定法[1]: ada將腺苷脫氨產生次黃苷和氨。乙個ada活性單位在測試特定條件下每分鐘脫氨1μmol腺苷成為次黃苷。

通過動態測量腺苷265nm處吸光度下降的速度,可以測算ada的活性大小,kaplan法由此建立。由於高底物濃度造成吸光度過高,該法僅適用於腺苷濃度低於40μmol/l。如此低的底物濃度達不到底物飽和要求,造成ada活性檢測失真。

因此,該法不適用於臨床應用。

奈氏顯色法[2]:原理為腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷水解,產生次黃嘌呤核苷和氨。ada催化底物產生的氨與奈氏試劑作用,然後進行比色測定。

該法操作簡單,但靈敏度不高,需要大量血清和基質,且要嚴格控制奈氏試劑應用液酸鹼度和顯色後至比色時間,否則反應液易變混濁而影響測定結果。

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