土壤脲酶（urease）活性的測定方法：靛酚比色法
（一）方法原理
土壤中脲酶活性的測定是以尿素為基質，酶促水解生成的氨與酚類化合物起反應生成藍色的靛酚，顏色深度與氨含量相關，因而用於脲酶活性的測定。
（二）試劑
1）甲苯
2）10%尿素：稱取10g尿素，用水溶至100ml。
3）檸檬酸鹽緩衝液（ph6.7）：184克和147.5克氫氧化鉀溶於蒸餾水。將兩溶液合併，用1mol/lnaoh將ph調至6.7，用水稀釋至1000毫公升。
4）苯酚鈉溶液（1.35mol/l）：62.
5克苯酚溶於少量乙醇，加2毫公升甲醇和18.5毫公升丙酮，用乙醇稀釋至100毫公升（a），存於冰箱中；27克naoh溶於100毫公升水（b）。將a、b溶液儲存在冰箱中。
使用前將2溶液各20毫公升混合，用蒸餾水稀釋至100毫公升。
5）次氯酸鈉溶液：用水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩定。
6）氮的標準溶液：精確稱取0.4717克硫酸銨溶於水並稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標準液。
（三）測定步驟
（1）標準曲線繪製
吸取配置好的氮溶液10ml，定容至100ml，即稀釋了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚鈉，仔細混合，加入3ml次氯酸鈉，充分搖盪，放置20分鐘,用水稀釋至刻度。將著色液在紫外分光光度計上於578nm處進行比色測定，以標準溶液濃度為橫座標，以光密度值為縱座標繪製曲線圖。
（2）土壤中脲酶活性的測定
稱取10 g土壤置於100ml容量瓶中。用2ml甲苯處理15分鐘。往瓶中加入10ml 10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩衝液（ph6.
7）。仔細混合後，將瓶放在37℃恆溫箱中，放置3 h。與此同時，進行以水代替基質，及無土壤的基質對照測定。
培養結束後，用熱至38℃的水稀釋至刻度。搖勻，將懸液過濾。吸取1ml濾液於50ml容量瓶中，用蒸餾水加至10ml。
然後按標準曲線繪製的操作加入苯酚鈉等試劑，顯色，比色，最後根據標準曲線求出氨態氮含量。
以每克土壤在37℃下24h內酶解尿素釋放的nh3-n 的毫克數來表示脲酶活性。
土壤蛋白酶活性測定方法：銅鹽比色法
（一）方法原理
本法基於以精膠為基質，酶解後所釋放的氨基酸使其與銅鹽反應形成藍色複合物。用比色測定顏色深度，計算出氨基酸含量，來度量酶的活性。
（二）試劑
1）1%精膠
2）甲苯
3）銅-磷酸鹽溶液：① 27.3g cucl2·h2o溶於1 l水；②64.
5g na2hpo4·12h2o溶於500ml 水，加入7.2g naoh，稀釋至1l；③57.21g na2b4o7溶於1.
5l 水，加入100毫公升0.1 mol/l hcl稀釋至2l，使用按照1：2：
2的體積分數前將上述①、②、③混合。
4）甘氨酸標準溶液的配製：取 267.9mg甘氨酸溶於蒸餾水，稀釋至 1 l （1ml含50g nh3-n）。
（三）操作步驟
（1）標準曲線繪製
取0、5、10、15、20 ml 甘氨酸標準溶液，用蒸餾水加至20 ml，然後加入20 ml 新配製的銅-磷酸鹽溶液。顯色後，用分光光度計在650nm處測定，繪製標準曲線。
（2）土壤蛋白酶活性測定
稱取5g土壤置於100ml 三角瓶中，加入甲苯2ml ，放置15 min，加入20ml 1%精膠溶液，於37℃恆溫培養24h，於此同時，以水代替基質作為對照。
培養結束後，將懸液過濾，取10ml 濾液，加水10ml，銅-磷酸鹽溶液20ml。顯色後，用分光光度計在650nm處測定，根據標準曲線求出nh3-n含量。
以每克土壤在37℃下24h內酶解蛋白質釋放的nh3-n的質量（g）表示蛋白酶活性。
土壤磷酸酶測定方法：磷酸苯二鈉法
（一）方法原理
本法基於以磷酸苯二鈉為基質，酶解釋放出的酚，使其與氯代二溴對苯醌亞胺試劑反應生色。用比色法測定出游離的酚量，用以表示磷酸酶活性。
（二）試劑配製
1）0.5％磷酸苯二鈉（用緩衝液配製）；
2）ph5醋酸鹽緩衝液、ph7檸檬酸鹽緩衝液、ph9.4硼酸鹽緩衝液；
3）氯代二溴對苯醌亞胺試劑：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯醯亞胺，用10ml 96％乙醇溶解，貯於棕色瓶中，存放在冰箱裡。儲存的黃色溶液未變褐色之前均可使用；
4）酚的標準溶液：
酚原液——取1g重蒸酚溶於蒸餾水中，稀釋至1l，貯於棕色瓶中；
酚工作液——取10ml 酚原液稀釋至1l（每毫公升含0.01毫克酚）；
5）甲苯；
6）0.3％硫酸鋁溶液。
（三）操作步驟
（1）標準曲線繪製
取1、3、5、7、9、11和13ml酚工作液，置於50ml容量瓶中，每瓶加入5ml緩衝液和4滴氯代二溴對苯醌亞胺試劑，顯色後稀釋至刻度，即得0.0002、0.0006、0.
0010、0.0014、0.0018、0.
0022和0.0026mg·g-1濃度的酚標準溶液梯度。30min後比色測定。
繪製標準曲線。
（2）土壤磷酸酶的測定
稱取5g風乾土置於200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，輕搖15min後，加入20ml 0.5％磷酸苯二鈉（酸性磷酸酶用醋酸鹽緩衝液；中性磷酸酶用檸檬酸鹽緩衝液；鹼性磷酸酶用硼酸鹽緩衝液），仔細搖勻後放入恆溫箱，在37℃下培養24h。
後於培養液中加100ml 0.3％硫酸鋁溶液並過濾。
吸取3ml濾液於50ml容量瓶中，然後按繪製標準曲線所述方法顯色。用硼酸緩衝液時，呈現藍色，在風光光度計上於660nm處比色。
磷酸酶活性，以37℃下24h後1g土壤中釋放處的酚的毫克數表示。
土壤蔗糖酶測定方法：3,5- 二硝基水楊酸比色法
（一）方法原理
蔗糖酶酶解所生成的還原糖與3,5- 二硝基水楊酸反應而生成橙色的3-氨基-5-硝基水楊酸。顏色深度與還原糖量相關，因而可用測定還原糖量來表示蔗糖酶的活性。
（二）試劑
1）酶促反應試劑：基質5%蔗糖（用ph5.5磷酸緩衝液配製）；甲苯
2）葡萄糖標準液（1mg/ml）
預先將分析純葡萄糖置80℃烘箱內約12小時。準確稱取500mg葡萄糖於燒杯中，用蒸餾水溶解後，移至500ml容量瓶中，定容，搖勻（冰箱中4℃儲存期約一星期）。若該溶液發生混濁和出現絮狀物現象，則應棄之，重新配製。
3）3,5- 二硝基水楊酸試劑（dns試劑）
將5.0g3,5-二硝基水楊酸溶於200ml2nnaoh溶液中（不適宜用高溫促溶），接著加入 500ml含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻。再加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解後，定容至1000ml。
暗處儲存備用。
（三）測定步驟
（1）標準曲線繪製
分別吸1 mg/ml的標準葡糖糖溶液0、0.2、0.4、0.
6、0.8、1.0ml於試管中，再補加蒸餾水至1ml，加dns試劑3ml混勻，於沸水浴中準確反應5min（從試管放入重新沸騰時算起），取出立即泠水浴中冷卻至室溫，以空白管調零在波長540nm處比色，以od值為縱座標，以葡萄糖濃度為橫座標繪製標準曲線。
（2）土壤蔗糖酶測定
稱取5 g土壤，置於100ml三角瓶中，加10 ml水、1ml甲苯。搖勻土壤均勻分散後，放置15分鐘，加入15ml5%蔗糖-磷酸緩衝液。搖勻、塞緊，放於37℃恆溫箱中，培養24h。
按此操作，用不加土壤的基質和150℃乾熱滅菌1h的土壤進行對照試驗。培養結束後，用濾紙過濾，取1ml濾液，按繪製標準曲線方法，測定並由標準曲線其中還原糖含量。
土壤蔗糖酶活性，以1g土壤在37℃時，24h釋放出的葡萄糖毫克數來表示。
漆酶活性測定方法
一 測 o2法 漆酶是一種多酚氧化酶，它所催化的反應過程中有o z 的介入。測量反應的耗氧量既可間接地推知漆酶的活性。較早建立的瓦氏呼吸器檢測法便是基於這一原理。這一方法後來改進為利用氧電極來測量耗氧量，如弗羅納等以愈創木酚為底物，利用氧電極測定了漆酶催化反應過程中的耗氧量，並將 1個漆酶活性單位定...
土壤養分及酶活性測試方法剖析
硝態氮的測定 雙波長分光光度法測定土壤硝態氮 土壤肥料，2006 1 50 52，塗常青，溫欣榮。原理 利用硝酸鹽和亞硝酸鹽在203和230波長處有較強紫外吸收峰，利用雙波長係數倍數法的公式 選擇合適波長時，從而消除亞硝酸鹽 有機質的影響。消除干擾後，硝酸鹽氮的含量與呈線性關係，線性範圍為0 2.0...
生化檢驗輔導 酶活性的測定方法
1 按反應時間分類法 20世紀50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性，現多已不用。50年代中期開始採用連續監測法。這種方法用自動生化分析儀上完成，可以測酶反應的初速度，其結果遠比固定時間法準確，在高濃度標本尤為明顯，但本法也受到反應時間，反應溫度，試劑等的影響...