硝態氮的測定：《雙波長分光光度法測定土壤硝態氮》，土壤肥料，2006（1）：50～52，塗常青，溫欣榮。
原理：利用硝酸鹽和亞硝酸鹽在203和230波長處有較強紫外吸收峰，利用雙波長係數倍數法的公式：選擇合適波長時，從而消除亞硝酸鹽、有機質的影響。
消除干擾後，硝酸鹽氮的含量與呈線性關係，線性範圍為0～2.0，由此建立了測定土壤硝態氮的新方法。
硝酸鹽氮標準比色液：稱取0.7220與105℃烘箱中烘乾2乾燥冷卻後的與小燒杯中，加入二次蒸餾水溶解，定量轉入1000的容量瓶中，定容、搖勻，即為10的硝酸鹽氮標準液。
稱取該溶液10.00於100容量瓶中，定容、搖勻，即為10的硝酸鹽氮標準比色溶液。
亞硝酸鹽氮標準比色液：稱取0.1232於小燒杯中，加入二次蒸餾水，定量轉入250容量瓶中，定容、搖勻，即為100亞硝酸鹽氮標準溶液。
稱取該溶液10.00於100容量瓶中，定容、搖勻，即為10亞硝酸鹽氮標準比色液。
實驗方法：
1、係數的確定：
分別準確移取10硝酸鹽氮使用液2.00、10亞硝酸鹽氮標準使用液2.00、土壤浸提液2.
5置於各自的25比色管中，用二次蒸餾水定容、搖勻，用1的石英比色皿，以二次蒸餾水作參比，在-紫外可見分光光度計上在190～300範圍內掃瞄，從而確定土壤樣品、硝酸鹽氮的最大吸收波長203，在230處吸收較弱，而亞硝酸鹽氮在210處有最大吸收，在230吸收較弱。選取203、230為測量波長和參比波長測定土壤中硝態氮，從而可消除樣品中主要干擾組分亞硝酸鹽氮的干擾。據的公式計算，求得。
2、標準曲線的繪製：
分別去10硝酸鹽氮標準比色液0、0.25、0.50、1.
00、1.50、2.00、2.
50置於25比色管中，各管加入二次蒸餾水至刻度，搖勻，用uv-紫外可見分光光度計在203和230處，用1石英比色皿測定吸光度。用的計算方法求得校正吸光度。
標準曲線回歸方程為
3、 樣品測定：
準確稱取10充分拌勻的鮮土壤，分別置於100具塞三角瓶中，加入0.1和50.00二次蒸餾水，於振盪器上振盪10。
放置10後，將懸液的上部清夜用於濾紙過濾。吸取濾液1.00～20.
00置於25比色管中，用水準確稀釋至刻度，分別在203～230波長下測量吸光度。按下式計算土壤中硝態氮含量：
式中，為回歸方程算出的含量，；
25為比色測定液總體積，；
d為稀釋倍數；
m為鮮土壤樣品質量，。
銨態氮的測定：浸提-靛酚藍比色法
1、 方法原理：
用溶液浸提土壤，把吸附在土壤膠體上的及水溶性浸提出來。土壤浸出液中的銨態氮在強鹼性介質中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性燃染料靛酚藍，溶液的顏色很穩定。在含氯0.
05～0.5範圍內，吸光度與銨態氮含量成正比，可用比色法測定。
2、 試劑：
（1）溶液：稱取149.1溶於水，稀釋至1；
（2）苯酚溶液：稱取苯酚（，化學純）10和硝基鐵***()100稀釋至1，此試劑不穩定，須貯於棕色瓶中，在4℃冰箱中儲存；
（3）次氯酸鈉鹼性溶液：稱取10、磷酸氫二鈉（）7.06、磷酸鈉（）31.
8和52.5次氯酸鈉（，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10溶於水，稀釋至1，貯於棕色瓶中，在4℃冰箱中儲存；
（4）掩蔽劑：將400酒石酸鉀鈉（）與100的二鈉鹽溶液等體積混合，每100混合液中加入10溶液0.5；
（5）2.50銨態氮（）標準液態：稱取乾燥的0.
4717溶於水，洗入容量瓶後定容至1，製備成銨態氮（）100的貯存溶液；使用前將其加水稀釋40倍，即配製成含銨態氮（）2.5的標準溶液備用。
3、分析步驟：
（1）浸提：稱取相當於20.00乾土的新鮮土樣（若是風乾土，過10號篩）準確到0.
01，置於200三角瓶中，加入溶液100，塞緊瓶塞，在振盪機上振盪1，取出靜置，待土壤-氯化鉀懸濁液澄清後，吸取定量上層清液進行分析。如不能在24進行分析，用濾紙過濾懸濁液，將濾液儲存在冰箱中備用。
（2）比色：吸取土壤浸出液2～10（含2～2.5）放入50容量瓶中，用溶液補充至10，然後加入苯酚溶液5和次氯酸鈉鹼性溶液5，搖勻。
在20℃左右的室溫下放置1後，加掩蔽劑1以溶解可能產生的沉澱物，然後加水定容至刻度，用1比色槽在625波長處進行比色，讀取吸光度。
（3）工作曲線：分別吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0標準液於50容量瓶中，各加10氯化鉀溶液，同（2）比色。
（4）結果計算：
土壤中含量（）=
式中：—顯色液銨態氮的質量濃度（）
—顯色液的體積（10）
—分取倍數
—樣品質量（）
脲酶測定（比色法）：（《土壤微生物生態學及其實驗技術》）
1、 方法原理：
脲酶廣泛存在於土壤中，它能酶促尿素分解成氨、二氧化碳和水。測定脲酶的方法很多，包括比色法、擴散法、電極法等，其中比色法最為常用，現介紹苯酚-次氯酸鈉比色法，該方法以尿素為基質，根據酶促產物氨與苯酚-次氯酸鈉作用（在鹼性溶液中及在亞硝基鐵***催化作用下）生成藍色的靛酚，來分析脲酶活性。
2、 試劑配製：
（1）6.7檸檬酸鹽溶液：取368檸檬酸於600蒸餾水中，另取295溶於水，再將兩種溶液合併，用1將調至6.7，並用水稀釋至2。
（2）苯酚鈉溶液：稱取62.5苯酚溶於少量乙醇中，加2甲醇和18.
5丙酮後用乙醇稀釋至100（液），儲存於冰箱中。稱取27溶於100水中（液），儲存於冰箱中。使用前，取、兩液各20混合，並用蒸餾水稀釋至100備用。
（3）次氯酸鈉溶液：用水稀釋製劑至活性氯的濃度為0.9﹪，溶液穩定。
（4）10﹪尿素溶液：10尿素溶於100水中。
（5）的標準溶液：精確稱取0.4717硫酸銨溶於水稀釋至1，則得1含0.1的標液，再將此液稀釋至10倍製成氨工作液（0.01）.
3、操作步驟：
取5風乾土置於50三角瓶中，加1甲苯。15後加1010﹪尿素溶液和20檸檬酸鹽緩衝液。搖勻，37℃恆溫箱中培養24。
過濾，取1濾液注入50容量瓶中，然後按配製標準曲線顯色方法進行測定。
標準曲線配製：分別取0、1、3、5、7、9、11、13氮工作液，移至50容量瓶中，然後加蒸餾水至20，再加4苯酚鈉溶液和3次氯酸鈉溶液，隨加隨搖。20後顯色、定容。
1內在分光光度計上於波長578處比色，根據吸光值與氮溶液濃度繪製標準曲線。
3、 結果計算：
以24後1土壤中的質量（）表示脲酶活性（）：
=式中：為由標準曲線求得的濃度（）；
為顯色液體積（50）；
為分取倍數；
為烘乾土質量（）。
磷酸酶測定（磷酸苯二鈉比色法）：（《土壤微生物生態學及其實驗技術》）
1、 方法原理：
測定磷酸酶主要根據酶促作用生成的有機基團量或無機磷量計算磷酸酶活性。前一種通稱為有機基團含量法，是目前較為常用的測定磷酸酶的方法，後一種稱為無機磷含量法。研究證明，磷酸酶有3種最適值：
4～5、6～7和8～10，因此測定酸性、中性和鹼性反應土壤的磷酸酶，要提供相應的緩衝液才能測出該土壤的磷酸酶最大活性。測定磷酸酶常採用的緩衝體系有乙酸鹽緩衝液（值=5.0～5.
4）、檸檬酸鹽緩衝液（值=7.0）、三羥甲基氨基甲烷緩衝液（值=7.0～8.
5）和硼酸緩衝液（值=9～10）。磷酸酶測定時常用的基質有磷酸苯二鈉、酚酞磷酸鈉、甘油磷酸鈉、或-萘酚磷酸鈉、-硝基苯磷酸鈉等。現介紹磷酸苯二鈉比色法。
2、 試劑配製：
（1）甲苯
（2）磷酸苯二鈉：稱取6.75磷酸苯二鈉（），用緩衝液稀釋至1（1含25酚）。
（3）9.0硼酸鹽緩衝液：
、0.05硼砂溶液：19.07硼砂（）溶於1000蒸餾水中；
、0.2硼酸溶液：12.37硼酸（）溶於1000蒸餾水中；
硼酸鹽緩衝液（9.0）：80+20混勻即得。
（4）緩衝溶液配製：
a、酸性磷酸酶：醋酸鹽緩衝液（5.0）
、0.2醋酸鈉溶液：16.4無水醋酸鈉（）溶於1000蒸餾水中或是27.2三水醋酸鈉（）溶於1000蒸餾水中。
、0.2醋酸溶液：11.55醋酸定容於1000。
7+3混合即得。
b、鹼性磷酸酶：硼酸鹽緩衝液（10.0）
、硼砂液：19.072硼砂溶於1000蒸餾水中。
、溶液：4溶於1000蒸餾水中。
50+43加水稀釋至200，混合即得。
c、中性磷酸酶：檸檬酸鹽緩衝液（7.0）
、0.1檸檬酸溶液：21.01檸檬酸（或是19.21）溶於1000蒸餾水中。
、0.2磷酸氫二鈉：35.61磷酸氫二鈉（或是53.63磷酸氫二鈉或是71.7磷酸氫二鈉）溶於1000蒸餾水中。
3.63+16.37混合即得。
（5）2.5﹪鐵***：12.5鐵***溶於500水。
（6）0.5﹪的4-氨基安替吡啉溶液：2.54-氨基安替吡啉溶於500水中。
（7）酚原液：2酚用蒸餾水定容至1（2），溶液在暗色中穩定。
（8）酚工作液：取2.5原液稀釋至100（0.05酚）。
3、操作步驟：
稱取5風乾土於50三角瓶中，加1甲苯，輕搖15.再加入20磷酸苯二鈉（酸性磷酸酶用5.0的醋酸緩衝液，中性磷酸酶用7.
0的檸檬酸鹽緩衝液，鹼性磷酸酶用10.0的硼酸鹽緩衝液），仔細搖勻後放入恆溫箱，在37℃下培養24。
用緻密濾紙過濾，取1濾液於100容量瓶中，加510.0硼酸鹽緩衝液，再加入32.5﹪的鐵***和30.
5﹪的4-氨基安替吡啉溶液，搖勻，這時溶液呈粉紅色，然後加水定容。待顏色穩定時（20～30），在波長570處測定各樣品的吸光度。土壤的磷酸酶活性根據標準曲線求出酚的含量（為了消除土壤引起的誤差，每一土壤需做無基質的對照，整個試驗需做無土壤對照）。
磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克數表示（若用的毫克數表示，結果需乘0.32；若用的毫克數，結果需乘2.29）。
標準曲線配製：分別向100容量瓶中注入0、1、3、5、7、9、11工作液並顯色定容（分別相當於0.05、0.
15、0.25、0.35、0.
45、0.55酚），待顏色穩定後，比色繪製標準曲線。
4、結果計算：
以24後1土壤中發布的酚的質量（）表示磷酸酶活性。
=式中：為由標準曲線求得的酚濃度（）；
為顯色液體積（50）；
為分取倍數；
為烘乾土質量（）。
過氧化氫酶的測定（容量法）：
1、 試劑配製：
（1）0.3﹪溶液：按1:100將30﹪用水稀釋。
（2）3硫酸：168濃定容於2容量瓶。
（3）0.1高錳酸鉀（1/5）溶液：稱取化學純高錳酸鉀3.161溶於1無蒸餾水中，貯於棕色瓶中備用。
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