【實驗目的】
掌握常規壓片法和去壁低滲法製備植物染色體標本的基本原理和方法。
【實驗原理】
植物染色體標本的製備，常用分生組織，如根尖、莖尖和嫩葉做材料。常規壓片法仍是
當今觀察植物染色體常用的方法，其程式包括取材、預處理、固定、解離、染色和壓片等步
驟。但壓片法的不足之處是染色體很難分散開，染色體容易變形和斷裂。而去壁低滲法則能
較好地克服這弊端，方法也較簡單，不需要特殊裝置。它是借助纖維素酶和果膠酶將細胞間
的果膠質和組成細胞壁的α-纖維素、半纖維素溶解掉，使植物細胞只有質膜，然後按哺乳
類動物染色體標本製備的方法——低滲、火焰乾燥法製備植物染色體標本。實驗證明，這一
技術可以顯著提高染色體的分散程度，現已廣泛應用於植物染色體顯帶，姊妹染色單體交換
等研究，大大促進了植物細胞遺傳學研究的發展。
【實驗儀器、材料和試劑】
（一） 儀器、用具
培養箱、顯微鏡、剪刀、鑷子、刀片、培養皿、濾紙、吸水紙、青黴素瓶、染色缸、載玻片、蓋玻片、玻璃板、酒精燈
（二）材料
蠶豆種子、洋蔥鱗莖
（三）試劑
1．giemsa 母液：
原液的配製：
giemsa 粉0.5g
甘油（ar33ml
甲醇（ar33ml
先將少量甘油加入研缽中，將 giemsa 粉充分研細，再倒入剩餘甘油，並在 56℃溫箱中保溫 2 小時，然後再加入甲醇混勻，貯存在棕色瓶內。
2．磷酸緩衝液、甲醇、冰醋酸、混合酶液、秋水仙素（或對二氯苯）
3．改良苯酚品紅染色液 。
【方法與步驟】
（一）壓片法製備染色體標本
1． 取材把洋蔥鱗莖置於盛水的小燒杯上，放在 25℃溫箱中髮根，待根長至 2cm左
右，於上午 9～11 時剪下根尖。或者把蠶豆種子預先浸泡 6小時，然後轉入墊有濕潤濾紙的培養皿中，置 25℃溫箱中發芽，幼根長至 1～2cm左右，於上午 9～11時剪下根尖。
2． 預處理將剪下的根尖置對二氯苯飽和水溶液，或 0.02%秋水仙素溶液中，浸泡處
理 4 小時。
3． 固定用水洗淨處理過的根尖， 經甲醇-冰醋酸 （3∶1） 固定6～12 小時， 再經 95%、
85%酒精各半小時，最後轉入 70%酒精中，4℃儲存備用。
4． 解離取出根尖，用蒸餾水洗淨，放入 1n hcl中 60℃解離 8～10min，再用蒸餾
水洗淨。
5． 染色改良苯酚品紅染色液染色 5～10min 。
6． 壓片把根尖放在載玻片上，切取分生區部分，加一滴染液，用鑷子搗碎，蓋上蓋
玻片， 然後在蓋玻片上放上一濾紙， 用鉛筆上的橡皮頭輕輕敲打蓋片， 使細胞和染色體分散。
7． 鏡檢。
（二）去壁低滲火焰乾燥法製備植物染色體標本
1． 取材將蠶豆種子放在 25℃溫箱中發芽，待根長到 1～2cm時使用。
2． 前處理根尖用 0.05%秋水仙素溶液處理 3～4 小時。
3． 固定用水洗淨處理過的根尖，經甲醇/冰醋酸（3∶1）固定 4 小時。
4． 酶解倒去固定液，用蒸餾水充分洗淨，切取分生區放到青黴素小瓶中，加入混合
酶液（2.5%纖維素酶+2.5%果膠酶） ，25℃下酶解 2～4 小時。
5． 低滲倒去酶液，用蒸餾水慢慢沖洗 2 次，然後在蒸餾水中浸泡 30min，低滲後可
用下面兩種方法製備染色體標本：
懸液法6．製備細胞懸液倒去蒸餾水，用鑷子將材料夾碎。
7．固定向細胞液中加入 2～3ml 新鮮固定液，吹打製成細胞懸液。
8．去沉澱靜置片刻，使大塊組織沉澱，然後吸取上層細胞懸液，去掉沉澱物。
9．去上清液將上層細胞懸液靜置 30min 左右，視細胞沉澱，用吸管輕輕吸去上清液
留約 1ml 左右細胞懸液製備標本。
10．製備標本取一張預先在蒸餾水中冰凍的清潔載玻片，用滴管滴 2～3 滴細胞懸液
於其上，立即將一端抬起，並輕輕吹氣，促使細胞分散，然後在酒精燈上微微加熱烤乾。
11． 染色乾燥的**用20∶1 （ph7.2的 1/15m磷酸緩衝液∶giemsa原液） 染色30min，
蒸餾水洗，空氣乾燥。
12．鏡檢。
塗片法6．固定倒去蒸餾水，將低滲過的材料用 3∶1固定液固定 30min 以上。
7．塗片將材料放在預先在蒸餾水中冰凍的清潔載玻片上，加一滴固定液，迅速用
子將材料搗碎，邊搗邊加固定液，並去掉大塊殘渣。
8．火焰乾燥 。
9．染色（與懸液法相同） 。蒸餾水洗，空氣乾燥。
10．鏡檢。
【注意事項】
前處理的濃度和時間以及酶解、低滲的時間直接影響染色體標本製備的質量。
基因在染色體上
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