人核基質蛋白 22ELISA檢測試劑盒使用說明書

2022-10-01 18:03:02 字數 2156 閱讀 4992

本試劑僅供研究使用標本:尿液

試驗原理:

nmp-22試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(elisa).已知nmp-22濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將nmp-22和生物素標記的抗體同時溫育。

人核基質蛋白-22elisa檢測試劑盒洗滌後,加入親和素標記過的hrp。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然後加入底物a、b,和酶結合物同時作用。產生顏色。

顏色的深淺和樣品中nmp-22的濃度呈比例關係。

自備材料

蒸餾水。

加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振盪器及磁力攪拌器等。

安全性避免直接接觸終止液和底物a、b。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

實驗中不要吃喝、抽菸或使用化妝品。

不要用嘴吸取試劑盒裡的任何成份。

操作注意事項

試劑應按標籤說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過後的標準品應丟棄,不可儲存。

實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封儲存,以免變質。

不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

使用一次性的吸頭以免交叉汙染,吸取終止液和底物a、b液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

使用乾淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裡的各種成份及樣品。

洗滌酶標板時應充分拍乾,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

底物a應揮發,避免長時間開啟蓋子。底物b對光敏感,人核基質蛋白-22elisa檢測試劑盒避免長時間暴露於光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成後應立即讀取od值。

加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及儲存方法

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液後,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿-----edta、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

儲存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃儲存,避免反覆冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,人核基質蛋白-22elisa檢測試劑盒檢測前先離心或過濾。

不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振盪混勻。

洗滌緩衝液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔、加入待測樣品50ul於反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振盪混勻,37℃溫育1小時。

甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振盪30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍乾。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

每孔加入80ul的親和鏈酶素-hrp,輕輕振盪混勻,37℃溫育30分鐘。

甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振盪30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍乾。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

每孔加入底物a、b各50ul,輕輕振盪混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液後應立即測定結果。

在450nm波長處測定各孔的od值。

侷限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到精確的結果。

試劑盒效能

1.靈敏度:最小的檢測濃度小於1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關係數r值為0.990。

2.特異性:不與人其它細胞因子反應。

3.重複性:板內、板間變異係數均小於10%。

結果判斷與分析

1、儀器值:於波長450nm的酶標儀上讀取各孔的od值

2、以吸光度od值為縱座標(y),相應的nmp-22標準品濃度為橫座標(x),做得相應的曲線,樣品的nmp-22含量可根據其od值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值範圍:0-80u/ml

4、敏感度:0.1u/ml

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