hubei normal university
gfp蛋白的基因轉殖與表達
王玲（指導老師：王友如）
（湖北師範學院生命科學學院生物科學0802班湖北黃石 435002）
摘要：關鍵詞：重組質粒；基因轉殖；綠色螢光蛋白；瓊脂糖凝膠電泳
cloning and expression of gfp
wang ling (tutor: wang youru)
(college of life sciences department, hubei normal university, huangshi, 435002)
abstract:
key words:
gfp蛋白的基因轉殖與表達
李鋌（指導老師：王友如）
（湖北師範學院生命科學學院湖北黃石 435002）
綠色螢光蛋白 (green fluorescent protein, gfp) [1 ]是一類存在於包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內的生物發光蛋白[2 ]。當受到紫外或藍光激發時,gfp 發射綠色螢光[1]。近年來,隨著gfp在各種異源細胞,如細菌、昆蟲及植物細胞中的表達,gfp作為一種新型的報告物在生物學界引起了廣泛的關注關於它的基本結構、生色團、發光機理及基因的改造均有大量的研究報道。
它是一種操作方便, 不用加外源底物, 就能在活細胞中檢測的分子探針。將徹底改觀過去標記方面的研究方法, 在分子生物學研究中有廣闊的應用景[3 ]。
本實驗通過雙酶切和凝膠電泳等方法研究綠色螢光蛋白基因的轉殖與表達，主要是通過對本次實驗過程的了解與**，為研究綠色螢光蛋白的螢光特性及其應用做準備。
重組質粒（pet-28a-gfp），dh5ɑ（轉殖菌），bl-21（表達菌）
orion ph計（上海公司）,hd-3紫外檢測儀（日本****）
高壓滅菌鍋yxq-ls-50s（上海博迅****），手持式紫外燈
雙面紫外超淨工作台（蘇州淨化裝置****）,電熱套
感受態細胞製備與鹼裂解法提取質粒試劑及溶液
注：solutionⅰ：葡萄糖（50mmol/l）, tris-cl (ph 8.0) 25mmol/l
edta (ph 8.0) 10mmol/l
solutionⅱ：naoh 0.2m , sds 10%(w/v)
solutionⅲ：koac 5m , 冰醋酸 , h2o (ph 4.8)
table 4 雙酶切法(10ul)
分子生物學
清道夫細胞 處理氧化修飾了的膽固醇，不具備膽固醇轉化作用，最終導致膽固醇細胞破裂。2 逆轉錄 以病毒rna為模板，指導含有全部病毒資訊的dna合成過程。3 細胞凋亡 在基因程式性控制下有別於細胞壞死的一種，有規律的自我消亡。4 dna的c值 同種生物基因組dna含量是恆定的，乙個單倍體基因組中的dn...
分子生物學
第一章緒論 一 dna的發現 1928年英國科學家griffith等人發現肺炎鏈球菌使小鼠死亡的原因是引起肺炎。首先用實驗證明基因就是dna分子的是美國著名的微生物學家 ery。1952年，美國冷泉港卡耐基遺傳學實驗室科學家hershey和他的學生chase從事噬菌體侵染細菌的實驗。二 分子生物學簡...
分子生物學
一 名詞解釋 1 基因 能夠表達和產生蛋白質和rna的dna序列，是決定遺傳性狀的功能單位。2 基因組 細胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質的總和。3 端粒 以線性染色體形式存在的真核基因組dna末端都有一種特殊的結構叫端粒。該結構是一段dna序列和蛋白質形成的一種複合體，僅在真核細胞染色體末端存...