一、 摘要
採用離子交換樹脂分離蛋白，掌握離子交換柱層析法的基本操作技術。用層析柱、蠕動幫浦、自動部分收集器、紫外分光光度計等儀器洗脫蛋白質分子，成功分離純化，得到洗脫曲線，得出穿透峰、洗脫峰1、洗脫峰2三個峰。
二、 材料與裝置
澱粉酶溶液、離子交換樹脂、平衡緩衝液、洗脫緩衝液ⅰ（含0.3m氯化鈉的平衡緩衝液）、洗脫緩衝液ⅱ（含0.5m氯化鈉的平衡緩衝液）、蒸餾水、20*1cm層析柱、試管架、蠕動幫浦、自動部分收集器、紫外分光光度計、100ml燒杯*2、100ml量筒、 膠頭滴管、1ml移液槍、玻璃棒。
三、 實驗步驟
1、 裝柱：取直徑1cm，長度20cm的層析柱。將柱垂直安裝於鐵架上。
自頂部注入處理好的樹脂懸浮液，樹脂沉降時，多餘的液體從出口流出，不斷緩慢添樹脂懸浮液，至樹脂沉降至15cm左右的高度即可。
2、 平衡並調整流速：在層析柱中充滿平衡緩衝液，將上端柱頭旋緊，用大約20ml平衡緩衝液平衡樹脂，同時將流速調整為2.0ml/min。
3、 上樣：開啟柱子上端柱頭，讓柱內緩衝液流出，液面與樹脂面相切，關閉出口；由柱上端仔細加入蛋白樣品0.5ml，開啟出口，讓樣品進入樹脂，同時開始收集流出液；當柱內液面與樹脂面相切時關閉出口；加入0.
5ml平衡緩衝液，開啟出口，待緩衝液面與樹脂面相切時關閉出口，再加入0.5ml緩衝液，重複此步驟。緩慢新增平衡緩衝液直至頂端，旋好柱頭。
4、 洗脫：採用不斷提高離子濃度的方法階段洗脫蛋白。以2.
0ml/min流速，用體積為50ml平衡緩衝液、50ml洗脫緩衝液ⅰ、50ml洗脫緩衝液ⅱ分三段洗脫；3min收集一管，體積大約為6ml，測定各管a280nm。
5、 繪製洗脫曲線，收集吸收峰的試管。
四、 實驗結果
五、 討論
1、 由洗脫曲線可得到三個吸收峰，達到實驗要求，實驗結果表示蛋白質分子被洗脫下來，達到分離的效果。
2、 得到的吸光值偏小，原因可能是在平衡樹脂時所用的平衡緩衝液少於20ml，使柱內ph未達到所需ph，造成差異；也可能是上樣時，新增緩衝液過快是的樣品被稀釋，造成誤差。
六、 結論
澱粉酶成功分離純化，得到洗脫曲線及三個吸收峰。
七、 參考文獻
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