實驗二武陵山野生食用菌母種的製作與培養
一.目的
1.了解食用菌菌種的**，菌種的分離方法。
2.掌握pda培養基的配製、分裝、滅菌的方法和食用菌菌種的培養方法。
3.熟悉和掌握無菌操作的原理和操作方法。
二.原理
首先是製作菌種，即通過孢子或組織分離出菌絲體，菌絲體擴大繁殖成為生產菌種；其次是將菌種接種於基質中，生產出食用菌的子實體。食用菌菌種是食用菌菌種生產和科研工作的基本材料。食用菌生產的菌種**於野生食用菌資源，我國豐富的食用菌資源為我國食用菌產業的發展奠定了堅實的基礎。
食用菌菌種的最初**是來自於野生食用菌資源，採用孢子或組織分離法分離得到食用菌菌種，然後把該菌種進行人工馴化、菌種選育，得到具有生產價值的食用菌菌種。母種是食用菌生產的經菌絲體，菌絲體擴大繁殖成為生產菌種；而該過程必須在無菌環境中以無菌操作進行，以防雜菌汙染。一般在接種箱，無菌室或超淨工作台上進行接種。
接種前要對環境進行消毒，一般是用37%~40%甲醛溶液於接種前按5ml/m3 的量燻蒸半小時。也可用紫外燈照射半小時，以殺死空氣中的微生物。
適合食用菌生長繁殖的混合培養料稱培養基，由於不同的食用菌生長繁殖需要相應的營養條件及適宜的酸鹼度。因此，在配製培養基時，還要根據所使用的配方，按次序配製培養基，並調節ph等。在液體培養基中加入瓊脂等凝固劑後，就可製成試管斜面或在培養皿內倒成平板，成為用途廣泛的食用菌母種培養基。
三.實驗材料
1.野生食用菌標本。
2.量筒、試管、玻棒、鋁鍋、電爐、天平、高壓滅菌鍋、超淨工作台、接種鉤、酒精燈、火柴、蒸發皿、甲醛、高錳酸鉀、70%酒精、無菌平皿
3.培養基配方
（1）pda培養基馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂18~25g 和水1000ml
（2）完全培養基蛋白腖2.0g、酵母膏2.0g、葡萄糖20g 、mgso4h2o 0.5g、k2hpo4 1.0g、kh2po4 1.0g、瓊脂20g、水1000ml
四.方法與步驟
（一）培養基的配製
1.把馬鈴薯洗乾淨，去皮，挖掉芽眼，切成大約1cm3 的小方塊，在天平上稱取200g。
2.把切好的馬鈴薯小塊倒入鋁鍋中，加水1000ml，煮沸15~30min。
3.用紗布（2~3層）過濾。
4.濾液加水至1000ml，加入蔗糖及瓊脂。
5.加熱使瓊脂完全熔化。
6.趁熱加入分裝筒。分裝於試管中（裝量為1/5），塞棉花塞。
7.高壓滅菌（121℃,30分鐘）後，排成斜面。
（二）菌種分離
1.洗淨手並用75%酒精消毒。
2.用75%酒精棉球對採集的野生食用菌子實體表面擦洗（消毒）。
3.用手術刀將食用菌子實體菌蓋延菌柄方向切去多餘部分，同時切去菌柄極處1cm左右，然後將經上述處理後的菌柄置於無菌培養皿處，用75%酒精浸泡1~2min。
4.用無菌鑷子夾住子實體用無菌水沖洗4~5次，重複3.4操作一次。
5.將手術刀， 鑷子（夾住菌柄）在火焰上灼燒，滅菌冷卻。
6.用鑷子夾住菌柄，將菌柄切下1cm小段，然後將小段切成長方體，灼燒冷卻，進一步切成綠豆大小的方塊。
7.滅菌接種針接種。
（三）菌種培養
食用菌母種培養一般放在培養箱中，溫度控制視所用菌種而定。一般平菇以22~25℃為宜。
五.高壓鍋的使用方法
高壓鍋的使用方法
（1）將待滅菌的物品（如：試管）放在滅菌筒內，包與包之間應留有適當的空隙，以利蒸汽流暢，達到徹底滅菌。
（2）蓋上軟管插入滅菌桶的槽內，上下對齊，對角擰緊螺栓，切勿漏氣。
（3）加熱。水沸騰之後，排盡鍋內空氣（當壓力表的指標指到0.51kg/cm2）時，開啟放氣閥放氣，進行兩次放氣閥，公升壓。
（4）待壓力達到要求時，保持穩定，並開始計算時間。
（5）達到規定的滅菌時間後，關閉電源，讓其自然降壓冷卻。
（6）待壓力完全降到「0」後，鬆動對角螺栓，取下蓋子，從滅菌桶內取出材料。
（7）若滅菌物為試管，則應立即放入特製的木箱內排成斜面。
（8）若滅菌鍋用畢後，應把鍋內的水倒掉，以免日久腐蝕。
六.作業
p396 1，2，3
MS培養基配方
實驗八 ms培養基的配製和滅菌 一 實驗目的 了解培養基的配製原理和方法，掌握其配製過程和分裝方法。二 實驗材料 天平 牛角匙 量筒 燒杯 攪拌機 膠桶 組培瓶 6種母液 白沙糖 活性炭 卡拉膠。三 方法步驟 1 母液配製 大量元素 母液 mg l 100ml。2 微量元素 母液 3 鐵鹽 母液 4...
培養基如何配製
培養基的型別 在實驗室中配製的適合微生物生長繁殖或累積代謝產物的任何營養基質，都叫做培養基。由於各類微生物對營養的要求不同，培養目的和檢測需要不同，因而培養基的種類很多。我們可根據某種標準，將種類繁多的培養基劃分為若干型別。1 根據對培養基組成物質的化學成分是否完全了解來區分，可以將培養基分為天然培...
培養基濕熱滅菌
濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣 沸水或流通蒸汽進行滅菌的方法，以高溫高壓水蒸氣為介質，由於蒸汽潛熱大，穿透力強，容易使蛋白質變性或凝固，最終導致微生物的死亡，所以該法的滅菌效率比乾熱滅菌法高。一 方法 煮沸滅菌法 巴氏滅菌 間歇滅菌 高壓蒸汽滅菌等。1 煮沸滅菌法 是指將待滅菌物置於沸水中滅菌的方法。煮...